人elisa試劑盒批發(fā)免疫測(cè)定技術(shù)的基礎(chǔ)在于抗原抗體之間的特異結(jié)合反應(yīng),所以任何的確診試劑離不開的質(zhì)料,如抗原抗體,酶等。曾經(jīng)用于免疫測(cè)定的抗原一般為各種純化抗原,而抗體則為純化抗原免疫動(dòng)物后獲得的多克隆抗體和運(yùn)用雜交瘤技術(shù)得到的單克隆抗體,而抗原或抗體的符號(hào)物如酶標(biāo)結(jié)合物則通過(guò)各種化學(xué)合成方法制備。近年來(lái),跟著分子生物學(xué)的展開,運(yùn)用基因工程方法制備各種特別的。
操作方法：
雙抗體夾心法：
1、包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃
隔夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗刷緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡(jiǎn)稱洗刷，下同）。
2、加樣：加必定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗刷。（一同做空白孔，陰性對(duì)照孔及
陽(yáng)性對(duì)照孔）。
3、加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，參與新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí)，洗刷。
4、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中參與暫時(shí)制作的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5、中止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中參與2M硫酸0.05ml。
6、效果斷定：可于白色布景上，直接用肉眼查詢效果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)標(biāo)明。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)則的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。
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